明膠酶譜法原理：
酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺 （SDS-PAGE，含0.1％明膠）電泳分離，然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2（基質(zhì)金屬蛋白酶-2）和MMP-9恢復(fù)活性，在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠，zui后用考馬斯亮藍將凝膠染色，再脫色，在藍色背景下可出現(xiàn)白色條帶，條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。
復(fù)性原理：在電泳過程中，SDS與樣品中的MMPs結(jié)合（當然是可逆性結(jié)合），破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用，而只有當將膠置Trition中洗脫（是放在搖床上搖，30min／次，做2次或15min/次，4次。靜置于Trition中是不妥的）時，由于SDS被Trition結(jié)合而去除，從而使MMPs恢復(fù)了活性。
1、制備聚丙烯酰胺時應(yīng)注意排除氣泡。
2、明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴格準確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。
3、用大梳子。
4、孵育液的PH在7.5-7.6，復(fù)性的TRITON時間長了會有絮狀物，所以實驗時盡量使用新鮮配置的。
5、孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中，因為會改變孵育液的PH值，在普通孵箱即可。
6、明膠要4度保存，配好后1周內(nèi)使用。
更新時間：2017-04-11 
瀏覽次數(shù)：1645
您的位置：