RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

信帆生物提供 RT-PCR檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)測(cè)，RT-PCR代測(cè)?？蛻?hù)只需要提供樣本，其他所有試劑都由本公司提供。一般7-10天出結(jié)果，提供原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)室所用儀器型號(hào)，圖片，動(dòng)力擴(kuò)增曲線(xiàn)等。

Real -Time PCR，即實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法，它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，并通過(guò)Real -Time PCR檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出以來(lái)，廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針?lè)▋煞N。
 
服務(wù)內(nèi)容
    通過(guò)用SYBR熒光染料法 或者TaqMan熒光探針?lè)?，我們能為客?hù)提供實(shí)時(shí)熒光定量PCR全套技術(shù)服務(wù)。同時(shí)我們將提供給客戶(hù)完整的實(shí)驗(yàn)資料和分析步驟，客戶(hù)只需提供標(biāo)本和標(biāo)本的基本信息。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 使用進(jìn)口穩(wěn)定的定量PCR儀

2. 核心試劑采用原裝試劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。
3. 豐富的qPCR經(jīng)驗(yàn)，基因類(lèi)別有DNA、mRNA、miRNA等；物種類(lèi)別有人、鼠、雞、牧草、酵母菌、金黃色葡萄菌等。

客戶(hù)須知：

1. 客戶(hù)須在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息，客戶(hù)應(yīng)當(dāng)清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定；
2. 盡可能新鮮和足量的組織（50-100mg）、細(xì)胞樣品（10⁶）或血清，或直接提供純化好的總RNA（≥0.5μg/樣品）；
3. 所需要檢測(cè)mRNA注冊(cè)號(hào)和名稱(chēng)；

服務(wù)承諾：

1. 我方對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及客戶(hù)所提供的資料保密，未經(jīng)客戶(hù)許可，我方不得將客戶(hù)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和相關(guān)信息對(duì)外公布。
2. 本公司將在收到客戶(hù)樣本后并簽訂合同的第二個(gè)工作日起開(kāi)始檢測(cè)工作。
3. 提供給客戶(hù)原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)流程及報(bào)告。

RT-PCR實(shí)驗(yàn)流程：

1.實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備；

2.樣本總RNA提??；

3.RNA濃度檢測(cè)；

4.反轉(zhuǎn)錄；

5.數(shù)據(jù)分析及結(jié)論。

 
PCR實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)：
1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒(méi)有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。

 

熒光定量 PCR 中的一些術(shù)語(yǔ)
CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)意義顯著增長(zhǎng)(即穿過(guò)閾值線(xiàn))時(shí)的循環(huán)次數(shù)，或者說(shuō)是從基線(xiàn)到指數(shù)增長(zhǎng)的拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。
閾值：閾值的默認(rèn)設(shè)置是 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的 10 倍。
CT值與起始模板的量成線(xiàn)性關(guān)系。

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